本产品来源于极端耐热菌 Pyrococcus abyssi (P.abyssi)，经重组表达纯化后获得。
Thermostable RNase HII 是一种核酸内切酶，识别并切割 RNA/DNA 杂合链中的 RNA 链，不切割 ssDNA、dsDNA，对单链 RNA 切割活性极低。Thermostable RNase HII 在单核糖核苷酸残基处从 5′端进行切割，切割后产生一个 5′端磷酸基团和一个 3′端羟基。该 Thermostable RNase HII 在 60~80℃具有最佳活性，在 37℃~95℃间均具有活性，在室温下活性低。本品极度耐热，95℃温育 15min 后，几乎没有活性损失，可与 PCR 各反应体系兼容。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
| 热稳定核糖核酸酶HII | HSM060141 | 200 U |
产品组分
| 组分 | 规格 |
| Thermostable RNase HII (2 U/μL) | 100 μL |
| HII Dilution Buffer | 2×1 mL |
| 10×RHII Buffer | 1 mL |
活性定义
一个单位（U）是指在 60℃下，30min 切割 100 pmol 含有单个核糖核苷酸的嵌合 DNA/RNA 杂交双链体底物所需的酶量。
建议反应条件
1× RHII Buffer；60℃温育。
失活条件
终浓度 1% SDS，95℃ 15min。
产品应用
1. RNase HII 依赖性 PCR(rhPCR)。
2. 减少或去除 PCR 反应中的引物二聚体。
3. 提高多重 PCR 产物的准确性。
4. 区分异种同源基因。
5. SNP 检测和稀有等位基因检测。
6. 降解冈崎片段的 RNA 部分。
7. LAMP 高灵敏度探针法检测。
8. 与 T7 Endo I 一起使用时，在掺入的核糖核苷酸位点产生双链断裂。
质量控制
蛋白纯度
经 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于 95%。
非特异性内切酶活性
37℃下，在 20μL 反应体系中将 2U Thermostable RNase HII 与 200ng 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 20%的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
DNase 活性
37℃下，在 20μL 反应体系中将 2U Thermostable RNase HII 与 15ng 双链 DNA 片段共同温育 16h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链 DNA 片段无变化。
RNase 活性
37℃下，在 10μL 反应体系中将 2U Thermostable RNase HII 与 500ng RNA 共同温育 1h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，超过 90%的 RNA 保持完整。
宿主 DNA 残留
采用中国药典 2020 版四部通则 3407 外源性 DNA 残留量测定法第三法定量 PCR 法，本品中大肠杆菌宿主细胞 DNA 残留量低于 1 拷贝/2U。
使用方法
1. 以 rhPCR 流程为例：
1) 以配合本公司的 2×常规 PCR 预混液（货号：HSM020111）使用为例：
| 试剂 | 使用量 |
| 底物上游引物（10 μM） | 1 μL |
| 底物下游引物（10 μM） | 1 μL |
| 模板 DNA | X μL |
| 2×常规 PCR 预混液 | 25 μL |
| Thermostable RNase HII | 20~200 mU |
| ddH2O | Up to 50 μL |
1) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
2) 设置 PCR 反应
| 步骤 | 温度 | 时间 | / |
| 预变性 | 95℃ | 3~5min | / |
| 变性 | 95℃ | 30s | 30~35 cycles |
| 退火 | 55℃~65℃ | 30s | |
| 延伸 | 72℃ | 30~60s/kb | |
| 终延伸 | 72℃ | 5min | / |
2. rhPCR 引物设计
注意事项
1. 该酶用于 rhPCR 时，需要使用 3′端带封闭基团的 PCR 引物。
2. 该酶在 37~80℃均有活性，其用量可根据不同的应用进行调节。
3. 该酶可兼容大多数 PCR 体系，同时对 Mg2+浓度无严格要求，在 1~6mM 范围内均可正常发挥活性。
