Thermostable RNase T1 是一种基于 RNase T1 经过蛋白定向进化得到的耐热突变体。与野生型 RNase T1 相比,Thermostable RNase T1 能够在 50℃的条件下保持 100%的活性,而野生型在同样的温度下活性至少下降 50%。更高的反应温度有助于充分打开 RNA 的二级结构,减少或避免其对酶切的影响,从而使酶切过程更加彻底。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
| 热稳定核糖核酸酶T1 | HSM060181-01 | 100 KU |
| HSM060181-02 | 500 KU |
产品组分
| 组分 | HSM060181-01 | HSM060181-02 |
| Thermostable RNase T1 (500 U/μL) | 200 μL | 5×200 μL |
| 10× RNase T1 Buffer | 1 mL | 5×1 mL |
活性定义
1 活性单位(U)是指在 37℃,pH7.5 条件下,以酵母 RNA 为底物,使 A260 变化 1.0 所需要的酶量。
质量控制
蛋白纯度:经 SDS-PAGE 凝胶电泳检测,蛋白纯度不低于 95%。
非特异性内切酶活性:37℃下,在 20μL 反应体系中将 500 U Thermostable RNase T1 与 200 ng 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,少于 20%的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
DNase 活性:37℃下,在 20μL 反应体系中将 500U ThermostableRNase T1 与 15 ng 双链 DNA 片段共同温育 16h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,双链 DNA 片段无变化。
产品应用
1. 去除 DNA 中的 RNA;
2. 去除重组蛋白中的 RNA;
3. RNA 测序;
4. 用于核糖核酸酶保护试验(与 RNase A 结合使用);
5. 测定不含 G 或低 G 含量 DNA 模板的转录水平。
使用方法
1. 反应体系:
| 试剂 | 体积 | 终浓度 |
| ssRNA | 1~10 μg | 50-500 ng/μL |
| 10×RNase T1 Buffer | 2 μL | 1× |
| RNase Inhibitor (40 U/μL)* | 1 μL | 2 U/μL |
| Thermostable RNase T1 (500 U/μL) | 0.4 μL | 10 U/μL |
| Nuclease-Free Water | Up to 20 μL | - |
注:为避免 RNase A 等环境中的 RNase 污染使底物 RNA 降解,建议在反应体系中加入 RNase Inhibitor(货号:HBP000402),底物 RNA 应在 RNase Inhibitor 加入并混匀之后加入。
2. 建议反应条件:
50℃孵育 15min。可根据实际情况适当延长或缩短孵育时间以达到最佳酶切效果。
注意事项
1. Thermostable RNase T1 的热失活是可逆的,建议通过柱纯化或酚/氯仿抽提的方法去除 Thermostable RNase T1。
2. RNase 相关实验请在通风橱或特定区域进行,以避免对其他实验产生影响。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套及口罩进行实验操作。
