宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒适用于生物制品样本中残留 DNA 检测的前处理。本试剂盒采用磁珠法 DNA 提取原理，可最大限度的分离纯化样本中的宿主 DNA，实现从不同复杂基质中回收微量 DNA 样本。该前处理试剂盒与瀚海新酶各个宿主细胞（CHO、E.coli、HEK293 等）DNA qPCR 检测试剂盒（PCR-荧光探针法）配合使用。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| 通用型磁珠法痕量核酸提取试剂盒 | HBP003605-1 | 25T |
| HBP003605-2 | 50T |
产品组分
| 组分名称 | 25T | 50T | 储存条件 |
|---|---|---|---|
| 裂解液 | 12.5 mL *1 | 25 mL* 1 | 室温 |
| 磁珠悬浮液 | 0.5 mL *1 | 1 mL * 1 | 2~8℃ |
| PW1 | 12.5 mL *1 | 25 mL * 1 | 室温 |
| 洗脱液 | 2.5 mL *1 | 5mL * 1 | 室温 |
| 蛋白酶k | 0.5 mL *1 | 1mL * 1 | 2~8℃ |
运输与保存方法
常温运输。
有效期
规定存储条件下 24 个月。
适用机型
本产品适用但不限于以下仪器：7500 Real-TimePCR System (ABI)，QuantStudio 5（ABI），SLAN-96P Real-TimePCRsystem， qTOWER3G（德国耶拿）
实验前准备
自备设备和试剂：
磁性分离架，移液器，水浴锅/金属浴，漩涡振荡器，1.5 mL 无菌无酶低吸附离心管，1000 μL、200 μL、10 μL 无菌无酶低吸附带滤芯枪头
5 M 的 NaCl
1× PBS 溶液（pH 7.4，无镁离子和钙离子）
异丙醇
在干净的试剂瓶中用无水乙醇和灭菌超纯水配置 70%乙醇溶液 40mL，标记为 PW2（配置后的 PW2 密封，室温保存，防止乙醇挥发）
无菌无酶八联管或 96 孔 qPCR 板
样本准备
生物制品纯化过程中的上游中间样品（可能含有较高的 DNA 含量）
待测样本为含量较高的 DNA 样本，可用 1× PBS 溶液对样本进行适当比例稀释后提取。为了保证检测的准确性，使样品的检测值在标准曲线线性范围之内（一般可考虑将高 DNA 含量样品稀释 100 倍或 1000 倍）。
样品 pH 过高或过低
一般情况下生物制品纯化过程中间样本的 pH 值均为中性，若样本的 pH<5 或者 pH>9，则会影响样本纯化处理效果。因此在样本处理前先测试一下样品 pH 值，并可以用 1 M 的盐酸或氢氧化钠调整样本的 pH 至中性后（pH 6.0～8.0）再进行纯化操作。
对照样品处理
样品平行处理：为了确保结果的准确性，建议每个样品平行进行三次 DNA 提取处理和检测。
阴性对照（NCS）：每次实验中都需要设置一个 NCS 作为空白样品，NCS 与其他待测样品一起进行处理，以检验在样品处理过程中是否存在交叉污染或环境污染。
加标回收（ERC）：用 ERC 来评估 DNA 提取的效率、回收率和准确度，并可用 ERC 来评估验证分析方法和系统性能。对具体样品的 DNA 加标量设定在其无加标测试值的 2-10 倍。
实验流程
（1）依次将 200 μL 样品、20 μL 蛋白酶 K、 10 μL 5M NaCl 加入 1.5 mL 离心管，上下颠倒混匀，瞬时离心收集液体至管底，55℃孵育30min。
（2）将离心管取出静置至室温，瞬时离心收集液体至管底。加入 450 μL 裂解液，200μL异丙醇和 20µL 磁珠，上下颠倒或涡旋震荡混匀，瞬时离心收集液体至管底。室温静置 10分钟，期间上下颠倒混匀 3 次（每次颠倒混匀后瞬时离心，将离心管盖液体离下来）。
（3）将含有样品的混合液置于磁力架上，静置 1 分钟（或至裂解液无色透明）。弃除上清液。注意：如果离心管盖上沾有磁珠，可在静置过程中将离心管与磁力架一同颠倒 3-4 次将磁珠洗下。
（4）去除磁力架，加入 500 µL PW1。涡旋混匀至完全重悬磁珠。将离心管置于磁力架上，静置 1 分钟（或至裂解液无色透明）。使用1mL 移液器弃除上清液。
（5）去除磁力架，加入 700 µL PW2。涡旋震荡 30S，混匀至完全重悬磁珠。将离心管置于磁力架上，静置 1 分钟后（或至裂解液无色透明）。使用 1mL 移液器弃除上清液。
（6）使用掌心离心机瞬时离心 8~10S，收集液体至管底。再次将离心管放置于磁力架，使用 10uL 移液器小心将底部液体取出，不要带走磁珠。将离心管保持于磁力架上，开盖室温静置晾干 2-3min。【第 6 步整个流程不得超过 5min。】
注意：在去除乙醇干燥时，观察磁珠状态，勿让磁珠太干，以免洗脱时不完全溶解，造成回收率偏低。
（7）加入 50~100 μL 70 ℃预热的洗脱液，涡旋混匀，瞬时离心收集液体至管底。70 ℃孵育 7~10min。
（8）将离心管置于磁力架上，静置 2 分钟，将包含有洗脱核酸的上清转移入新的离心管中。
注意：按要求丢弃实验废品废液，将纯化核酸样品于适宜条件保存或进行下一步实验。
注意事项
1.在操作过程中，请全程穿戴一次性手套、一次性口罩及实验服。使用无酶耗材等，最大程度避免 DNase 污染。裂解液与清洗液 1 中含有异硫氰酸胍或盐酸胍，会对皮肤及粘膜造成腐蚀，如不慎入眼或接触，请用大量清水冲洗后就医。
2.请勿将废弃液与漂白剂或酸性溶液混合，以免产生有毒挥发性物质。
3.只有严格遵守说明书的操作方法，全部使用本试剂盒配套的试剂才能保证最佳检测效果。
