产品概述
WS HHRevScript 逆转录酶来源于莫罗尼鼠白血病（Moloney Murine Leukemia Virus），采用可逆性修饰技术获得的热启动版本，能够在室温条件下抑制酶活，因此可在室温操作并配制反应体系，防止非特异性扩增，提高反应效率。另外，在 55℃下就能发挥活性，无需单独激活步骤。该款产品具有更高的温度耐受性、稳定性和逆转录合成能力，适用于高温逆转录。WS HHRevScript 逆转录酶更适用于一步法 RT-qPCR 反应和 RNA 全预混试剂。
产品组分
| 组分 | HMD3311-01 | HMD3311-02 | HMD3311-03 |
| WS HHRevScript 逆转录酶 | 0.05 mL | 0.5 mL | 10 mL |
| 5 x WS HHRevScript Buffer | 0.5 mL | 5 mL | 10×10 mL |
运输及保存方法
≤0℃运输；-25~-15℃保存。
单位定义
以 Poly (rA)·Oligo (dT)为模板/引物，在 37℃，10 min 条件下，掺入 1 nmol 的 dTTP 为酸不溶性物质所需酶量定义为 1 个活性单位（U）。
质量控制
• 蛋白纯度（SDS-PAGE）：＞98%
• 核酸内切酶残留：200 U 的本品和 1 μg λDNA 在 37℃下反应 16 小时，DNA 的电泳谱带不发生变化；
• 核酸外切酶残留：200 U 的本品和 1 μg λ-Hind Ⅲ digest DNA 在 37℃下反应 16 小时，DNA 的电泳谱带不发生变化；
• Nickase 残留：200 U 的本品和 1 μg pBR322 DNA 在 37℃下反应 16 小时，DNA 的电泳谱带不发生变化；
• RNase 残留：200 U 的本品和 1.6 μg MS2 RNA 在 37℃下反应 16 小时，RNA 的电泳谱带不发生变化；
• E.coli 基因组残留：200U 本品中残留的核酸经 E.coli 16s rDNA 特异性的 TaqMan qPCR 检测，E.coli 基因组残留＜1 拷贝。
反应体系和条件
| 组分 | 体积 |
| Template RNAa | optional |
| Oligo (dT)18（5 μM）or Random Primer Mix（50 μM） | 1 μL |
| dNTP Mix（10 mM each） | 1 μL |
| RNase Inhibitor（40 U/μL） | 1 μL |
| WS HHRevScript 逆转录酶（200 U/μL） | 1 μL |
| 5 x WS HHRevScript Buffer | 4 μL |
| Nuclease-free Water | Up to 20 μL |
a:
| Total RNA | 10 pg - 5 μg |
| Poly (A) RNA | 10 pg - 500 ng |
反应程序
| 温度 | 时间 |
| 50℃-55 ℃ | 5-30 min |
| 85℃ | 2 min |
注意事项
1）防止 RNase 污染，请保持实验区域洁净，操作时需穿戴干净的手套、口罩。实验所用的离心管、吸头等耗材均需保证 RNase-free。
2）cDNA 产物可在 -20℃或者 -80℃保存或立即用于 PCR（qPCR）反应。
3）用于 PCR（qPCR）反应的 cDNA 产物体积建议不超过 PCR 反应体积的 1/10。
