XbaI, GMP Grade 由大肠杆菌重组表达获得，能够在 15min~1h 内精确完成目标 DNA 酶切。本品采用符合 GMP 规范的生产与质量管理体系，保证生产过程以及原辅料全程可追溯。整个生产过程不使用抗生素和任何动物来源的原料及辅料，对宿主蛋白、外源 DNA、非特异性内切酶、DNase、RNase 等工艺相关杂质，以及微生物限度、细菌内毒素等进行严格控制。本品满足疫苗与药物生产等领域对原辅料的要求。
XbaI 可识别特异性位点，其识别序列和切割位点如下：
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
|---|---|---|
| XbaI, GMP Grade | HSM050772 | 20 KU |
产品组分
| 组分 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| XbaI, GMP Grade（20 U/μL） | HSM050772A | 1 mL |
| 10× CutFlex Buffer, GMP Grade | HSM051002 | 6×1 mL |
运输及保存方法
≤0℃运输；-25~-15℃保存。有效期 24 个月。
活性定义
在 37℃条件下，50 μL 反应体系中，1 小时内完全切割 1 μg λDNA（Dam-/HindIII digest）所需要的酶量定义为 1 个活性单位（U）。
质量控制
蛋白纯度（SDS-PAGE）：通过 SDS-PAGE 分析，蛋白检测纯度≥95%。
超长时间温育/星号活性：37℃下，在 50 μL CutFlex Buffer, GMP Grade 反应体系中将 20 U XbaI, GMP Grade 与 1 μg λDNA（Dam-/HindIII digest）共同温育 16 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
非特异性内切酶活性：37℃下，在 20 μL CutFlex Buffer, GMP Grade 反应体系中将 20 U XbaI, GMP Grade 与 200 ng 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 20%的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
非特异性 DNase 活性：37℃下，在 20 μL CutFlex Buffer, GMP Grade 反应体系中将 20 U XbaI, GMP Grade 与 15 ng 双链 DNA 片段共同温育 16 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链 DNA 片段无变化。
RNase 活性：37℃下，在 10 μL CutFlex Buffer, GMP Grade 反应体系中将 20 U XbaI, GMP Grade 与 500 ng RNA 共同温育 1 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，不低于 90%的 RNA 仍保持完整。
宿主 DNA 残留：采用中国药典 2020 版四部通则 3407 外源性 DNA 残留量测定法第三法定量 PCR 法，本品中大肠杆菌宿主细胞 DNA 残留量低于 10 拷贝/20 U。
宿主蛋白残留：采用中国药典 2020 版四部通则 3412 大肠埃希菌菌体蛋白质残留量测定法，本品中大肠杆菌菌体蛋白质残留量低于 50 ppm。
微生物限度检测：采用中国药典 2020 版四部通则 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法，本品需氧菌总数≤5 cfu/mL，霉菌和酵母菌总数≤5 cfu/mL。
细菌内毒素残留：采用中国药典 2020 版四部通则 1143 细菌内毒素检查法第一法凝胶法，本品中细菌内毒素残留低于 10 EU/mg。
支原体检测：采用支原体检测试剂盒（LAMP 法）检测 20 U XbaI, GMP Grade，结果为阴性。
重金属残留：采用中国药典 2020 版四部通则 0821 重金属检查法第一法，本品重金属残留低于 10 ppm。
产品应用
限制性内切酶消化、快速克隆。
反应体系和条件
在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
| 组分 | 体积 |
|---|---|
| ddH2O | Up to 50 μL |
| 10× CutFlex Buffer, GMP Grade | 5 μL |
| DNA | 1 μg |
| XbaI, GMP Grade（20 U/μL） | 1 μL |
| Total | 50 μL |
轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
反应条件：37℃孵育 15min~1 h
热失活：80℃，20min。
注：DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、去垢剂或高浓度盐，否则将会影响 XbaI 活性。
本说明书推荐体系可以提供较好的酶切效果，仅供参考，具体请以实验结果为准。
甲基化修饰影响
Dam 甲基化：剪切受阻
Dcm 甲基化：无影响
CpG 甲基化：无影响
EcoKI 甲基化：无影响
EcoBI 甲基化：无影响
不同 DNA 中的酶切位点数量
| DNA | 酶切位点数量 |
|---|---|
| λDNA | 1 |
| ΦX174 | 0 |
| pBR322 | 0 |
| pUC57 | 1 |
| pUC18/19 | 1 |
| SV40 | 0 |
| M13mp18/19 | 1 |
| Adeno2 | 5 |
注意事项
• 加入的酶体积不应超过总体积的 10%，避免酶储存液中过多的甘油引起星号活性。
• 酶储存缓冲液中的添加剂（例如甘油、盐）与底物溶液中的污染物（例如盐、EDTA、乙醇等）相同，因此反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。
