引 言
分子诊断试剂盒开发中,低拷贝样本漏检、多联检靶标缺失、批间不稳定——每一个痛点背后都是对核心酶原料的极限考验。化学修饰Taq酶,通过小分子化学基团与酶活性中心共价结合,在低温下将酶活彻底“锁死”,95℃高温加热后精准释放——这一机制赋予了它零动物源、极致封闭、超多重扩增、稳定性好等多重核心优势。
化学修饰Taq酶是IVD分子诊断试剂盒量产、超多重核酸检测、低拷贝痕量样本检测的高性价比原料,精准对应假阳性、低载量漏检、多重条带缺失、批间不稳定四大开发痛点,是多联检病原诊断、荧光定量核酸试剂盒的首选核心酶原料。
经化学修饰的Taq DNA聚合酶在室温下其活性被完全封闭,经过95℃热激10min可高效释放酶活。产品具有良好封闭特性,扩增特异性和扩增灵敏度显著提升,适用于多种检测场景。
测评数据
01、 聚合活性和外切活性封闭性能良好
选取市售的两个同类产品作为对照,检测化学修饰Taq酶的聚合活性和外切活性的封闭效果。红色线代表裸酶的荧光信号,黑色线代表无酶组,蓝色线代表化学修饰Taq酶。结果表明,HMD0223在45℃与引物、模板等扩增体系共孵育1h,无聚合活性泄露,也无外切活性泄露。
02、 热激10min酶活释放效率高
跟市售同类竞品相比,Supplier A和HMD0223在双活性封闭良好的前提下,热激活10min,HMD0223的酶活释放效率更高;Supplier B聚合活性封闭不全,检测热激活性释放效率偏高。
03、 扩增特异性高
跟市售同类竞品相比,相同投酶量下,HMD0223的扩增特异性更好,扩增产物量更高,其中Supplier B由于聚合活性封闭不全,出现非特异性扩增条带;Supplier A扩增特异性好,由于酶活释放效率偏低,产物量较少。
04、 扩增灵敏度高
以1 copy -10⁶ copy(7个梯度)的质粒为模板进行Taq man 探针法qPCR,结果表明低模板条件下HMD0223的扩增CT值更靠前,复孔重复性更好,扩增灵敏度可达1 copy。扩增效率在90-110%范围内,相关性R²≥0.99。
应用案例
01、适合超多重靶标的扩增
在20重扩增体系中进行目的片段的扩增,利用琼脂糖凝胶电泳分离产物。在相同投酶量下,HMD0223所有预期的片段都在凝胶中清晰可见,这款化学修饰Taq酶可以在同一反应中成功扩增多达 20个目的片段,适合超多重靶标的扩增。
02、适合Taq man探针法多重qPCR扩增
在下呼吸道四重扩增体系中,4个通道的扩增线型均呈”S”型,与同类竞品相比,CT值更靠前,荧光信号值更高,适合Taq man探针法多重qPCR扩增的应用场景。
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